RNA提取试剂的选择：

在我们试剂开发过程中，对于研发人员来说RNA的提取并不陌生，原理都很简单，但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。有同行会告诉我“现在市面上很多的RNA提取试剂，基本上可以满足开发人员前期实验需要，我这里要问的是，很多情况下为什么往往提取的RNA却容易失败呢？是试剂没有选对吗，有那些影响因素导致失败呢？下面就和大家一起聊一下，希望帮助大家！

结合自己多年工作经验，RNA提取失败的主要现象有三个：提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。

那么问题来了，我们究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢？答案来了，请拿好手机往下看：

第一，要确定材料的可用性，是成功的法宝。现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分，但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键，但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时，使用Takara公司的样品保护剂 Sample Protector for RNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便，同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外，如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中，可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化，减少实验组间的误差。

第二，选择合适的提取试剂是最重要的一步，是成功的顶梁柱。好的提取试剂在确保成功的同时，操作方便且经济实用。对于动物组织、简单的植物材料、各种微生物、培养细胞的total RNA提取，某公司公司的RNAiso Plus具有诸多的成功案例。随着2013年7月柱型提取试剂某公司的成功上市，进一步丰富了Takara RNA提取的产品线。该产品采用了独特的细胞裂解系统，无需苯酚氯仿抽提等步骤，简单快捷。组织或细胞裂解后，提取操作仅需20分钟便可完成。

 最后，对于富含多糖多酚的植物类组织提取是个难点，某公司精心研发的柱型提取试剂可以轻松解决这个问题。可以高效地从各种简单的植物组织材料（叶片、茎、幼苗等）、富含多糖多酚的植物组织材料（果实、种子等）、真菌提取高纯度的TotalRNA，适用范围广泛。按照标准流程，本试剂盒可以有效地提取分子量大于200 nt的RNA，也可以按照可选步骤提取得到包含Small RNA(<200 nt)的Total RNA。试剂盒中包含了RNA提取所需的全部试剂，无需额外购买其它试剂。

核酸分子杂交探针的选择：

根据不同的杂交实验要求，应选择不同的核酸探针。在大多数情况下，可以选择克隆的DNA或cDNA双链探针。但是在有些情况下，必须选用其它类型的探针如寡核苷酸探针和RNA探针。例如，在检测靶序列上的单个碱基改变时应选用寡核苷酸探针，在检测单链靶序列时应选用与其互补的DNA单链探针（通过克隆人M13噬菌体DNA获得）或RNA探针，寡核苷酸探针也可。长的双链DNA探针特异性较强，适宜检测复杂的靶核苷酸序列和病原体，但不适宜于组织原位杂交，因为它不易透过细胞膜进入胞内或核内。在这种情况下，寡核苷酸探针和短的PCR标记探针（80～150bp）具有较大的优越性。

在选用探针时经常会受到可利用探针种类的限制。如在建立DNA文库时，手头没有筛选特定基因的克隆探针，这时就可用寡核苷酸探针来代替。但必须首先纯化该基因的编码蛋白，并测定6个以上的末端氨基酸序列，通过反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探针。如果已有其它动物的同种基因克隆，因为人类和动物间在同一基因的核苷酸顺序上存在较高的同源性，因此可利用已鉴定的动物基因作探针来筛选人类基因克隆。对于基因核苷酸序列背景清楚而无法获得克隆探针时，可采用PCR方法扩增某段基因序列，并克隆人合适的质粒载体中，即可得到自己的探针。这种方法十分简便，无论基因组DNA探针还是cDNA探针都可以容易地获得，而且，可以建立PCR的基因检测方法，与探针杂交方法可作对比，可谓一举两得。