配对差异干扰试验的方案是：

1.   确定适当的待测物浓度（见《干扰检测中使用的被测量浓度》）。

2.    建立允许差异的标准（δ）。

3.    确定每个样品所需的复测次数（N）。

4.    从患者标本中准备一个基础混样。将基础混样分成每个待测物浓度的等份，并根据需要调整每个等份中的被测量浓度，同时考虑可能存在的任何内源性被测量。

5.    准备添加用干扰物质贮存液，其浓度为待测潜在干扰物质浓度的20倍。这就是添加用干扰物质贮存液。

6.    将贮存液和基础混样混合，比例为1份贮存液加19份基础混样（1比20稀释），搅拌均匀，配制成基础混样（T）。

例子：在10 mL容量瓶中加入9.5 mL基础混样，再加入0.5mL 20×贮存液，使总体积达到10.0mL。

7.    将用于制备贮存液的相同溶剂与基础混样混合到第二个烧瓶中，比例为1份溶剂与19份基础混样（1比20稀释），搅拌均匀，配制成对照样品（C）。

例子：在10 mL容量瓶中加入9.5 mL基础混样，再加入0.5mL 溶剂，使总体积达到10.0mL。

8.    在测量系统上对检测和对照样品进行N次复测。复测次数N在步骤3中确定。检测和对照样品都以与患者标本相同的方式进行分析，如果可以的话，在一次分析运行中进行。

注1：当测量程序有携带污染现象时，要仔细设置基础混样的顺序。

注2：从准备基础混样和对照样品到实际测量样品之间的时间可以根据分析物或干扰物质的稳定性、是否需要达到稳定状态等因素而变化。请读者注意了解分析物与干扰物质的相互作用，并据此进行操作。

9.    记录结果，以便进行数据分析。

注：当使用不同的贮存液浓度时，相应调整步骤6和7中的稀释液。

1.1、对干扰结果进行分析

干扰程度是主要的测量目标。在可能的情况下，这应该被确定为存在和不存在干扰物质时测量系统反应的平均差异（基础混样的平均检测结果减去对照样品的平均结果之差）。

另外，可以根据公式（3）计算出围绕差异的双侧100（1-α）%置信区间。置信区间不是必须的，但在监管审查中可能会被要求，并且有助于理解观察到的干扰周围的变异性。

此外，置信区间可用于进行统计学上的等效性试验，并得出没有医学上的干扰的结论，具有一定的统计学确定性。

注：方程（3）假定检测和对照样品的方差不一定相同。

为了计算相应的干扰百分比周围的置信区间，用公式（3）计算的置信区间的下限和上限除以对照样品的平均测量值（C），然后乘以10。

1.2、结果的解释

平均差异应以绝对值（例如，浓度单位）或相对值（浓度百分比）表示，如EP25中认可的例子。

当点估计值dobs在允许的差异（δ）范围内（或当允许的差异为百分比时，dobs%），就可以断定干扰物质引起的差异在最大允许的差异范围内。否则，就会得出结论，该差异在最大允许差异之外，存在干扰。在进行等效试验时，置信区间应在允许的差异范围内。

解释干扰检测结果时需要考虑的注意事项包括：

➤  由于误差或所用标本的限制，实际干扰可能与观察到的「点估计」不同。

➤  所检测的样品的人工性质可能带来了假象。

✔  实际的干扰物质可能不是母体药物，而是一种代谢物。

✔  检测标本基质可能不代表有关被测量的典型病理标本，并可能引入基质效应。

✔  由于例如蛋白质结合、金属络合、沉淀或分析物的异质性，添加的物质可能与病理样品中的干扰物质不完全相同。

➤  任意选择被测量的浓度可能不会显示出干扰。

✔  干扰作用可能只在与其他化合物的协同作用中或在其他物理化学条件下（例如，pH值变化）表现出来。

✔  在被测量和干扰物质的其他浓度下可能存在干扰，但在检测的特定浓度下不存在干扰。

✔  在医学决定点检测被测量浓度是很重要的，以便在医学上重要的被测量浓度检测干扰效应。

在表1中，在存在最大浓度的干扰物质（500 mg/dL）的情况下，评估了两种浓度的被测量（0.50 mg/dL和5.00 mg/dL）。一组成对的检测（有干扰物质）和对照（无干扰物质）样品被检测。检测和对照结果之间的差异以实际浓度单位和偏倚百分比计算。

注：患者标本中可能存在的两个水平的被测量浓度和最大干扰物质浓度（即「最坏情况」）适合于筛查。因此，在表1的例子中，建议在被测量浓度为0.50 mg/dL和5.00 mg/dL时，最大干扰物质浓度为500 mg/dL进行筛查。

表1 | 在0.50 mg/dL和5.00 mg/dL的测量液中含有500 mg/dL的干扰物质的配对差异检测和对照样品

表1A | 低值标本

缩略语：CI，置信区间；SD，标准差。

表1B | 高值标本

缩略语：CI，置信区间；SD，标准差。

生产厂家在低测量浓度（0.50 mg/dL）时使用的允许差异（δ）标准为± 0.10 mg/dL，在高测量浓度（5.00 mg/dL）时使用的允许差异（δ）标准为± 10%。

这个例子表明，在较低的测量浓度下观察到了干扰，只是因为观察到的-0.20 mg/dL的差异在±0.10 mg/dL的允许差异之外，而观察到的-9.0%的差异则在±10%的允许差异之内。

请注意，高标本的95%置信区间的上限在±10%的允许差异之外；但是，如前文所述，由于-9.0 %的点估计值在允许的差异之内，因此得出结论，干扰物质造成的差异在最大允许差异之内。

注：干扰不应该总是仅仅基于所有被测量浓度的偏倚百分比。对于某些被测量，通过考虑单位（如浓度、活性）的实际差异来确定干扰更为合适，特别是在被测量浓度较低的情况下，小的数值差异可能是一个大的偏倚百分比。

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来源： 诊断科学