在一些特殊情况下，可能需要进行评估，但前几章描述的方法可能并不充分或合适。
1、样本十分罕见
当样本很稀少时，设计评价是有问题的。
前面提到的CLSI文件中概述的验证和核查研究的最低样本数量可能无法实现。如果不能达到建议的最低数量，可以根据具体情况计算出适当的样本数量，以证明使用较少的样本是合理的。
有时可以包括添加/污染的样本以及样本的复制品。
足够数量的样本取决于许多因素，包括新的检测方法和比较检测方法之间的预期差异、测量的估计变异性、可接受的不精密度、期望的统计能力以及统计分析的方法。
足够数量的样本是使研究具有统计能力的必要条件，这样就可以有把握地说，假设的差异确实是真实的。
通常情况下，重要的临床差异是不知道的，因此不可能说明统计能力。在这些情况下，足够数量的样本会产生一个具有足够窄的CI的平均结果，并能传达真实的平均表现。
目前，CLSI对样本量的确定指导有限，但在生物统计学入门教科书中可以找到基本讨论。设计研究以减少样本量，同时保持合理的统计能力，或保持狭窄的CI，可能需要咨询统计学家。
2、参考检测方法和缺乏主要参考检测方法（金标准）
在某些情况下，特别是在开发使用新型测量物的检测方法时，或针对新出现的病原体，可能没有一个密切相关的测量物或任何测量物可以用来进行比较。
也有可能目前被接受为参考检测方法或主要参考检测方法的方法（例如，培养）与真正的疾病状态相比可能不完全准确。在这些情况下，可能有必要将检测方法的结果与真正的疾病状态进行比较。
如果主要参考检测方法是不完善的，而真正的疾病状态是已知的，可以用临床诊断来调和不一致的结果，而不是用第三个比较试验。
如果真正的疾病状态是未知的，可以使用复合比较方法，也可以使用临床诊断。当金标准和参考方法不存在时，可遵循既定的共识诊断算法，而这些算法应以证据为基础。
对于没有国际标准的定量检测方法（定量参考材料），可能无法准确确定数值偏差。
在这种情况下，检测方法是利用参考材料制定的，根据质谱法、电子显微镜法等对其进行了标称值；但参考材料可能不是所有检测方法制定者都普遍使用的，而且可能没有对其均匀性、稳定性、可换算性、质量控制等进行评估。
CLSI文件MM03讨论了有无主要参考检测方法的新分子方法的比较。
3、多重检测方法
越来越多的市售和实验室开发的分子检测方法被设计为在一个反应中检测多种分析物。
在计划验证或核实研究时，这些检测方法带来了重大挑战。CLSI文件MM17提供了研究设计的框架，并注意到多重检测方法所特有的因素，如获取包括每种分析物的参考材料和数据分析的复杂性。
4、非分子微生物学问题
4.1、抗菌剂灵敏度检测方法
CLSI抗菌药敏试验的参考方法是肉汤稀释法和琼脂稀释法。CLSI文件M07和M11中描述了这些参考方法的标准化程序。
然而，这些方法对于临床微生物实验室的常规使用可能不切实际。其他方法，包括盘式扩散法、梯度条、干燥肉汤微稀释板和自动肉汤微稀释系统都在使用。
CLSI文件M07和M100为实用的抗菌素灵敏度测试提供了全面的指导，根据解释断点选择特定的生物体来测试和报告抗生素。还涉及到常规的质量控制生物与测试频率，以及对抗菌素检测方法系统进行修改时的质量控制应用。
CLSI文件M50描述了如何对商业微生物鉴定系统进行QC，EP2文件为在风险评估的基础上创建个性化的质量控制计划提供指导，M27文件和M2文件中描述了微生物鉴定、抗菌素灵敏度测试和抗真菌灵敏度测试的验证。
根据Cumitech 31A，验证新的药敏试验方法的偏差可以通过三种方式之一完成，即与新方法进行比较：
✔ 与现有方法相比，不使用参考方法对不一致的结果进行仲裁；
✔ 与现有方法相比，使用参考方法对不一致的结果进行仲裁；
✔ 与参考方法同时进行。
Cumitech 31A中提供了统计计算的公式、验收标准以及在超过规定限度时的纠正调查和重新核查步骤。
可重复性（精密度）研究也是抗生素灵敏度检测方法验证的重要组成部分。Cumitech 31A中提供了使用已知抗性特征的生物体的协议，包括确定精密度基本一致、精密度分类一致和接受标准的规定。
当含有新抗生素的新小组在以前验证过的系统上投入使用时，实验室往往不能确定需要做哪些研究。
CLSI文件M100指出，不需要进行重复性研究，添加任何新的抗菌剂都需要进行15次重复计划或20天或30天计划的质控测试，之后可以每周进行质控测试。
4.2、血培养
血培养最常见的是使用自动连续监测血培养检测方法进行。由于这些系统产生的结果的关键性，必须进行严格的验证研究，以确保仪器和采集瓶的正确性能。
尽管CLSI没有提供这方面的指导，但Cumitech 31A中提供了建议，其中描述了何时以及如何进行验证研究和研究设计，并讨论了需要评估的重要参数，包括结果的及时性。
Cumitech 31A描述了两种可能的研究设计：平行血培养研究和播种血培养研究。
5、样本采集和运输介质
微生物学过程需要维护和操作活的生物体，样本的收集和运输需要与实验室其他部分使用的过程不同。微生物运输系统用于许多类型的样本，其设计是为了保持生物体的活力而不允许过度生长。
CLSI文件M40为微生物运输系统的生产厂家以及终端用户提供了QC标准。
采集和运输介质是微生物实验室检测方法和检测方法的一部分，实验室在使用前需要评估新的样本运输系统。
评估包括准备模拟样本，并将其置于各种运输条件下，包括时间长度和极端的温度、压力和机械力，包括气管系统和运输样本时经常使用的车辆，只要适合本机构。
用于分子测试的样本的运输系统必须确保目标核酸的稳定性。RNA目标不如DNA目标稳定，可能需要更广泛的测试。
对于基于试剂盒的检测方法，样本运输测试由生产厂家进行，作为药监批准过程的一部分。
按照生产厂家的说明执行检测方法将确保目标核酸的稳定性。对于LDTs，临床样本的稳定性需要根据内部收集的验证数据或科学文献中报道的研究来确定。M40和MM03文件中提供了更多信息。
6、微生物鉴定试验
对只鉴定一种分析物的未经修改的商业鉴定或诊断检测方法，或对鉴定一种或多种微生物的自动检测方法进行验证研究是相当简单的。Cumitech 31A中概述了进行研究以满足验证要求的指南。
CLSI文件M50描述了如何对商业微生物鉴定系统进行质量控制。
7、其他考虑因素
微生物实验室常规使用的一些项目，如培养基和个别试剂，可能不被监管机构或认证机构视为仪器、试剂盒或检测方法，因此可能没有必要在使用前进行完整的验证。
相反，这些项目可以通过CLSI文件M22中概述的实验室质量控制和验证协议进行监测，或遵循生产厂家的说明，以确保M22和M23文件中未列出的培养基的性能是合格的。
8、定性检测方法
定性检测方法的方法评价是多种多样的，正如定性测试的类型和用途一样。在许多情况下，这些评价涉及到检测方法结果与患者临床状态的关系。
CLSI文件EP12提供了定性检测方法性能评估的方案。
EP12文件重点关注那些具有二元结果的检测方法（阳性/阴性，存在/不存在），不涉及半定量的终点，如阴性、+1、+2、+3或稀释滴度。如果半定量终点被用于诊断临界值，CLSI文件EP12中的方案可用于评估该临界值。
尽管许多定性检测方法提供了看似简单的二元结果（阳性/阴性，存在/不存在），但结果仍然取决于被测物的浓度，围绕着被选为阳性/阴性（不存在/存在等）临界值的浓度对检测方法的性能进行评估是很重要的。
EP12介绍了C5至C95区间的概念，并提供了描述检测方法临界值周围的测量物浓度范围的协议。
这一信息为终端用户提供了哪些浓度的被测物会持续提供阴性反应（< C5）或持续提供阳性反应（> C95），以及那些重复结果不一致的浓度（在C5至C95区间内）的知识。
定性检测方法经常用于筛查和诊断目的，因此，对检测方法的临床准确性的评估是需要评估的主要特征。
EP12提供了确定或验证诊断灵敏度和诊断特异性的框架，并适当地评估定性检测方法之间的一致性。
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来源：诊断科学
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