细胞裂解是改变细胞通透性和活性的重要实验方法。主要分为化学法和机械法，前者比较温和，后者虽然产量高，但反应更剧烈，很有可能造成细胞中的DNA断裂。

裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法。

机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。

1，裂解液成分了解：

1）大多有效成分都是去垢剂，那么去垢剂是什么呢？

去垢剂功能的关键是具有两亲结构。所有的去垢剂都具有亲水“头部”区域和疏水“尾部”区域这一特征，这些结构特性使得去垢剂可以在水性介质中聚集。在足够高的浓度下，每个分子的极性亲水区域朝向极性溶质（水），而疏水区域聚集在一起，形成一个具有疏水核心的热力学稳定的胶束。去垢剂胶束的疏水核心区域与蛋白质的疏水表面结合，形成可溶性的蛋白质-去垢剂复合物。

去垢剂根据其亲水基团的不同分为：阴/阳离子去垢剂、非离子型两性去垢剂、两性去垢剂。

a 阴/阳离子型去垢剂：作用强烈，会更大程度的改变蛋白质的结构，更容易受到pH、离子强度和反离子的性质等因素影响；

b 非离子型去垢剂：作用温和，由于不分离蛋白质-蛋白质键，非离子型去垢剂使得蛋白质可以保留其天然的结构和功能，不易变形（疏水链长度较短的去垢剂更易引起蛋白质失活）；

c 两性去垢剂：相对于离子型去垢剂其更少产生变性，相对于非离子型去垢剂，又可以更有效的破坏蛋白质-蛋白质键并减少聚集。

2）配置裂解液都需要Tris缓冲液，是为什么呢？

a. Tris学名叫三羟甲基氨基甲烷，它和Tris-base是一个东西，1M的Tris溶液的pH值大约是10～11，即常说的Tris碱；

b. Tris-cl和Tris-HCl是一个东西，就是写法上有所不同，即常说的Tris酸；

c. Tris-HCl就是在Tris-base的溶液中加入适当量的盐酸，调成你所需要的PH值。

2，常用裂解液种类：

2.1. 主要成分：

 概述：A试剂是一种很温和的非离子型去垢剂，1%浓度基本可以破坏掉细胞膜，而对核膜的破坏作用较弱，结合特定的缓冲液可以获得胞浆蛋白。与蛋白结合力强，用于防止物质分子疏水间相互作用，确保蛋白的充分溶解和结构稳定。

 概述：B试剂是一种比较强烈的细胞组织裂解液，可裂解核膜。在SDS-PAGE电泳中，B试剂能使蛋白氢键和疏水键打开并结合蛋白分子，使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度电荷且远远超过蛋白分子原有电荷，从而掩盖蛋白间电荷差别，使得电泳迁移率只取决于分子大小这一因素。

3，配方：

1%TrisHCl (pH 8.0)

50mmol/LNaCl

150mmol/LPMSF(苯甲基磺酰氟)，

0.1mmol/L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂)，

1μmol/L(0.7μg/ml)Leupeptin(亮抑制肽)， 

0.5mg/mlAprotinin(抑蛋白酶肽)，

0.3μmol/L(1μg/ml)

(注:PMSF贮存液:

Aprotinin 贮存液:

Leupeptin 贮存液:

Pepstatin 贮存液 ：

4，细胞裂解液的主要目的:

1) 利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞;

2)溶解蛋白;

3)蛋白变性使其稳定;

4) 抑制蛋白酶活性]

配方：

缓冲体系：

等渗体系：

蛋白酶抑制剂：

变性剂和稳定剂：

中度变性剂和蛋白溶解剂：

强变性剂和蛋白溶解剂：