一，新冠病毒核酸测定（qRT-PCR法）如何进行结果判读？

依据《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南（第四版）》提供的引物及扩增参数，基因扩增结果判断如下。阴性：无Ct值或Ct≥40。阳性：Ct值<37，可报告为阳性。灰度区：Ct值在37-40之间，建议重复实验，若重做结果Ct值<40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性,否则为阴性。依据《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南（第五版）》在实验室要确认一个病例为新冠病毒核酸检测阳性，满足以下两个条件中的一个：

1．同一份标本中新型冠状病毒2个靶标（ORF1ab、N）实时荧光RT-PCR检测结果均为阳性。如果出现单个靶标阳性的检测结果则需要重新采样重新检测。如果仍然为单靶标阳性判定为阳性。

2．两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标阳性或同种类型标本两次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结果可判定为阳性。

但是，不同生产企业的产品依据自身产品的性能选定的基因不同，确定的Ct阳性界值也不同，如果用的是商品化试剂盒，则以厂家提供的说明书为准。此外，阴性结果也不能排除新冠病毒感染，需要排除可能产生假阴性的因素，包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确的保存、运输和处理样本；技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR抑制等。

二，新冠核酸检测出现假阴性的原因？

目前大家所关注的核酸检测“假阴性”概念，往往是指核酸检测结果与临床表现不符的“假阴性”，即临床症状及影像学高度疑似新冠肺炎，但核酸检测多次或始终为“阴性”。根据国家卫健委临床检验中心给出的新冠病毒检测“假阴性”的解释如下。在被感染者中检出核酸，需同时满足以下四个条件，

1.被感染者的细胞中有一定量的病毒：   

现有数据显示机体被病毒感染后，病毒通过鼻腔和口腔进入到咽喉部，再到气管和支气管，进而到达肺泡，感染者会经历潜伏期、轻度症状、再到严重症状的过程，不同病程阶段以及机体不同部位存在的病毒量有所不同。从细胞种类的病毒载量看，肺泡上皮细胞（下呼吸道）＞气道上皮细胞（上呼吸道）＞成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞等；从标本类型来看，肺泡灌洗液（最优）＞深咳痰＞鼻咽拭子＞口咽拭子＞血液。此外，粪便也有报道能检出病毒。但是考虑操作的方便性和患者的接受程度，目前临床常用的标本顺序是口咽部拭子＞鼻咽部拭子＞支气管灌洗液（操作复杂）和深痰（常为干咳难得到）。因此在某些患者中，口咽部或鼻咽部细胞中病毒量较少或极低，如果只取口咽部或鼻咽部标本检测，病毒核酸就检测不到。

2.标本采集时要采集到含有病毒的细胞并有效保存病毒核酸：

①采集部位不当，如采集口咽拭子时，采集深度不够；采集鼻咽拭子没有采到鼻腔深处等，可能采集到的细胞绝大部分都是不含病毒的细胞。②采样拭子使用错误，例如拭子头的材料推荐使用PE纤维、聚酯纤维、聚丙烯纤维等合成纤维，实际操作中使用了棉花等天然纤维（对蛋白质的吸附较强，不易洗脱）和尼龙类的纤维（吸水性不佳，导至采样量不足）。③病毒保存管使用错误，例如误用了易吸附核酸（DNA/RNA）的聚丙烯或聚乙烯塑料的保存管，导至保存液中核酸浓度下降。实际操作中推荐使用聚乙烯-丙烯聚合物塑胶与某些特殊处理的聚丙烯塑胶容器储存病毒核酸。上述环节操作不当均可能造成“假阴性”。

3.可靠的体外诊断试剂：

部分厂家的试剂产品由于研发时间短，也没有使用已知临床样本进行必要的性能确认，可能存在对试剂优化不充分以及试剂批间差异大等问题。

4.规范的临床实验室：

标本运输保存条件、临床实验室的规范操作、结果判读和质量控制等也是保证检测结果准确可靠的关键因素。

三，如何才能将新冠核酸检测“假阴性”的可能降到最低？

降低核酸检测假阴性应相对应地从产生假阴性的四个方面进行优化：

1.被感染者的细胞中有一定量的病毒： 

一个特定的疑似感染的患者，不同的病期，在不同的身体部位出现病毒的浓度会有差异，如咽部没有，却可能支气管灌洗液或粪便中有，如能同时或在疾病过程中的不同时间采取上述多种标本进行检测，会有助于“假阴性”的避免。

2.标本采集时要采集到含有病毒的细胞：

通过加强对标本采集人员的培训，可以在很大程度上解决该问题。

3.可靠的体外诊断试剂：

通过从国家层面开展试剂的检测性能评价研究，探讨存在的问题，可以进一步改进试剂质量，提高分析敏感性。

4.规范的临床实验室：

通过加强对实验室人员的培训，不断完善实验室质量管理体系，保证合理的分区、有能力的检测人员和严格的质量管理体系，可以减少因实验室检测操作层面出现的“假阴性”。