1、 胶体金的颜色 

溶胶的颜色取决于分散相物质的颜色、分散相物质的分散度和入射光线的种类，是散射光线还是透射光，粒子越小，分散度越高，则散射光的波长越短。对同一种物质的水溶胶来说，粒子大小不同，呈现的颜色亦不同。如胶体金颗粒在5～20nm之间，吸收波长520nm，呈红色的葡萄酒色；20～40nm之间的金溶胶主要吸收波长530nm的绿色光，溶液呈深红色；60nm的胶体金溶胶主要吸收波长600nm的橙黄色光，溶液呈蓝紫色。一般应用于免疫组织化学的胶体金颗粒为5～60nm范围内，溶液呈现红色。在相当的一段时期内保持其溶胶不变性，称为胶体金的稳定性。影响其稳定性的因素主要是电解质，其次是胶体金本身的浓度、温度及其他非电解质等。 

2、胶体金的稳定性 

溶胶的稳定性介于小分子离子溶液和粗分散相之间，其颗粒作布朗运动，不易受重力影响而下沉。然而，溶胶又是不稳定体系，它的胶粒溶剂化作用很弱，总面积较大、因在胶粒相互碰撞时，有自动合并为较大、较重的颗粒倾向。当胶体颗粒直径变大，超出胶体范围而从介质中沉淀出来的现象叫聚沉。影响其稳定性的主要原因有三点。 

(1) 胶粒间的相互吸引力  当胶粒相距很近时，这种吸引力可能导致胶体颗粒合并而变大。 

(2) 胶粒及其溶剂化层  胶粒及其溶剂化层(溶剂是水时就是水化层)的带电情况。一种溶胶的各个胶粒都带有相同的电荷。同性电荷相斥，双电子层变厚，胶粒带电量愈大，排斥力愈大，愈能阻止胶粒合并聚结，溶胶愈稳定。 

(3) 胶体接口的溶剂膜  当二个固体间夹有一厚层液体时，这层液体膜有一个反抗二固体接近的排斥力。两个胶粒要进一步接近，只有克服它们之间的溶剂化膜的斥力才有可能，因此溶剂膜的斥力是使溶胶稳定的原因之一。

3、溶胶的聚沉现象 

胶粒之间存在吸引力与排斥力这对矛盾，在溶胶胶粒带电及溶剂化的情况下，排斥力成为矛盾的主要方面，溶胶稳定而不聚沉。因为某种原因使溶胶粒带电量减到很小，甚至中和其所带电荷并能去溶剂化膜，胶粒之间可在更近的距离互相接近，引力成为主要矛盾，引力超过斥力时胶粒便聚结发生聚沉。引起溶胶聚沉的原因有。 

 (1)少量电解质对溶胶的聚沉作用  少量电解质即可使溶胶聚沉，但各种电解质的聚沉能力可用聚沉值来表示。聚沉值是在一定时间内使1L某浓度的溶胶产生聚沉所需电解质的最小物质的量(mm01)。显然，聚沉值愈小，聚沉能力愈大。聚沉值从实验中得出如下的规则：①电解质负离子对带正电的溶胶起主要聚沉作用，正离子对带负电的溶胶起主要聚沉作用；②同价离子聚沉能力几乎相等，不同价离子的聚沉能力随离子价增加而显著增加。电解质能使溶胶聚沉是由于电解质与胶粒带相反电荷离子的作用，中和了胶粒所带的一部分电荷，使胶粒电量减少，扩散层缩小，溶剂化层变薄，而当双电子层厚度缩至很小和溶剂化层变得很薄时，两个质粒间便可以更加接近，即不产生斥力，两个胶粒间因引力加大而合并的趋势增强，甚至引力占绝对优势以致使胶粒聚结而发生聚沉。 

4、胶粒的双电子层结构图 

 (2)温度对溶胶稳定性的影响  一般影响不大。当温度升高时，吸附能力减弱，溶剂化  程度降低，溶剂化层变薄，胶粒聚结，不稳定性增加。 

 (3)浓度对溶胶的稳定性的影响  浓度增大时，粒子间距离缩小，引力增加，容易聚结  而发生聚沉，所以制备比较稳定的溶胶，要有一定的合适浓度。

5、待胶体金标记蛋白质的准备

1）原理 

蛋白质在等电点或稍偏碱的情况下，根据电荷正负相吸的原理；被吸收附于胶体金颗粒表面，使其牢固结合，一般胶体金颗粒表面带负电，与蛋白质所带的正电荷基团间靠静电引力作用相结合。另外，由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒表面，形成一个蛋白层，从而阻止了胶体金颗粒的相互接触，使标记蛋白质的金探针较为稳定。 

2）待胶体金标记蛋白质的准备 

A.透析除盐 

蛋白质在提取和纯化过程中会保留一部分盐类成分，但用于胶体金标记的蛋白质应尽量降低电介质的成分，因此，在用前必须将多余的电介质除去。因为过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位，影响蛋白质的吸附。方法：将待标记的蛋白质装入透析袋中，用 蒸馏 水或低浓度的盐水(0.005mol/LNaCl，pH7.0)透析2h。 

B .去除聚合的蛋白质 

对于长期低温保存的蛋白质，特别是浓度超过2mg/mL，很容易形成聚合物，这些聚合物可影响标记效率及胶体金探针的稳定性，因此在标记前应离心除去，用时以100000g于4℃离心1h即可。调整蛋白质浓度至lmg/mL即可用于标记。