技术 | 化学发光免疫试剂发生跳值，是何原因？如何解决？

来源：医学检验沙龙、苏州润赢医疗、灯塔光免小助手等

化学发光免疫分析技术，通过对标记的化学发光物质发光的控制及测量，检测相应的生物标志物，因具有灵敏度高、检测快速、试剂稳定无生物毒性、易全自动等特点，成为免疫分析技术中最具发展前景的发光之一，在许多疾病的临床诊断中具有重大意义。

近几年来检验科关于跳值问题反馈较多，例如HBsAg、Anti-HBcll、等传染病项目，又比如一些高灵敏度项目，如TnI， TSH、HIV等项目。

跳值定义及表现形式

跳值：英文表述Irreproducible false positive，discrepancy outlier/ false positive，initially reactive/positive

定义：为样本及测试条件所导致的非重现性假阳或初测假阳性。测试结果表现为RLU偏高，经过重复测试，结果趋于正常；且该现象的重现性低，与系统的精密度无关。

表现形式：针对样本管的首次测试，往往RLU偏高，见下表（雅培，Architect 系统）：

跳值这个现象同时发生在多种使用不同的方法学的仪器上上，如ELISA、放射免疫检测、化学发光、电化学发光。雅培、罗氏、贝克曼和西门子的检测系统均有跳值问题的报道。

国际厂家肌钙跳值概率：

厂家&试剂	跳值概率（95%置信区间）	跳值概率（95%置信区间）
Abbott Architect i2000SR STAT Troponin-I	0.10% (0.01%–0.19%)	0.48–1.95% ②
Beckman Coulter Access2 Enhanced AccuTnI	0.44% (0.25%–0.63%)	1.40% ③
Roche Cobas e601 TroponinT hs	0.06% (0.00%–0.13%)	/
Siemens ADVIA Centaur XP TnI-Ultra	0.10% (0.01%–0.19%)	/

雅培ARCHITECT系统HIV项目跳值概率：

贝克曼DxI系统不同项目的跳值概率：

跳值发生的原因

目前发生跳值的原因目前还不是非常清楚，各个厂家给出的解释，以及相关文献报道的主要集中在分析前因素，比如样本凝血时间、凝集温度、离心条件、样本采集管等等。

1. 病人本身（潜在干扰物质）。

2. 采血管的材质、添加剂（不同厂家采血管质量不同，对于免疫项目影响不同）。

3. 样本体积(样本体积过少可能会导致样本针吸取到凝胶血细胞等）。

4. 采血后是否按照说明书要求颠倒混匀。

5. 样本的运送方式（样本运输时，必须按照相应的州，联邦及国际有关样本与感染物质的运输规定进行包装并添加标签。样本可以在环境温度、2-8℃(冰包)或-20℃或更低温度(干冰)中运输。不要超过上面所列的储存时间限制。运输前，建议将样本从凝块、血清分离胶或红细胞中分离出来）。

6.仪器运行过程中的电信号干扰。

7.样本凝血的时间★

评估项目：HIV
凝血时间	凝血小于5min	凝血20~30min	凝血1h以上
初测阳性数	20	2	0
复测阳性数	0	0	0
初测阳性率	50%	5%	0%
总样本数	40	40	80

由上图实验可看出凝血效果是否充分对跳值影响十分明显。如实验使用的为无添加剂的普通真空管，则一般厂家说明书上要求凝血时间为1 h或90 min以上；如果使用含促凝剂的血清管，则按照说明书要求，需要凝血20~30 min

8.样本的离心及转速★

评估项目：HIV
离心条件	3500rpm离心5 min	3500rpm离心15 min
初测阳性数	4	1
复测阳性数	0	0
异常值概率	0.72%	0.28%
总样本数	558	357

由上图实验可看出，增加离心时间可大大降低发生异常值的概率。离心时间和离心转速需要严格依照厂家说明书上推荐。

此外其他注意事项：采血体积达标、有添加剂的管抽血后及时颠倒混匀等都是会对样本凝血质量造成影响的因素。

解决措施

1.降低样本中的干扰物质对测试结果影响

控制样本质量：采血管、离心条件&速度&温度、采血体积

转移到微量杯测试

离心后重新测试

样本用竹签挑动表层后测试

其他注意事项：

2.延长样本离心时间

作者结论：个别标本由于离心制备不彻底，造成假阳性结果，如果忽略掉就会给临床造成误诊，引起不必要的医疗纠纷。故建议检验人员若遇到疑似阳性标本，最好延长离心时间，重复测定，可以降低假阳性率，增加检验结果的准确性。

3.增加血清标本的凝集时间

作者结论：考虑到孵育时间主要影响血液凝血是否充分，从而导致影响检测结果的纤维蛋白不能够从血清中充分分离。通过测定不同处理条件下的纤维蛋白原浓度发现两组标本中的纤维蛋白原浓度差异有统计学意义(P<0.01)，显示纤维蛋白可能是影响结果稳定性的一个重要因素。这与以前的研究认为凝血不充分影响血清cTnl的测定结果一致。因此建议用血清标本检测cTnI浓度时须严格控制孵育时间，最好以孵育20 min后处理为好，以降低假阳性率。

4.增加离心转速

雅培HBsAg项目，也存在因样本前处理条件不够，导致一定假阳性概率。