除非通过对适当的对照组的评估确认了IHC检测的可靠和令人满意的性能，否则IHC检测不应用于临床诊断目的。IHC对照的使用得到了专业协会和病理学质量组织的支持，如CAP、CLSI、NordicQC等。

阳性和阴性组织对照用于确认IHC染色方案是否正确执行，并被推荐用于目前经验证可用于临床的所有IHC检测。

根据制造商提供的特定检测信息、实验室的标准程序和检测目的，还可能推荐或要求使用阴性试剂对照（NRC）。

阳性组织对照是指已知含有相关抗原的组织或组织成分，因此可以预期它们会表现出与主要抗体的特定染色。因为它们可以揭示分析处理步骤中的错误，如试剂分配、抗原检索或检测，它们为防止假阴性结果提供合理的保证。

理想情况下，阳性对照组织表达的感兴趣的抗原水平接近诊断阈值，就像在肿瘤组织中经常看到的那样；这为检测可能因应用不充分的主要抗体（例如，抗体太稀或分配不当）而产生的假阴性结果提供了最大的灵敏度。

阴性组织对照是指已知缺乏相关抗原的组织或组织元素，因此不应表现出对主要抗体的特异度染色。阴性对照通过揭示与主要抗体或检测的其他成分相关的意外或脱靶染色的存在，为防止假阳性结果提供合理的保证。

组织对照可以是测试组织的内部或外部。内部组织对照是试验组织中的恒定元素，具有该组织类型的阳性或阴性染色特征。一般来说，它们比外部组织对照物更好，因为作为试验组织的组成部分，它们必然经受了与试验组织相同的分析前和分析条件。

外部组织对照是与测试组织分开的，来自于对感兴趣的抗原具有已知表达特性的样本。理想情况下，它们与患者组织安装在同一玻片上（玻片上对照），但也可以安装在单独的玻片上。

它们不一定是与测试组织相同的组织类型（见表1中选定Abs的阳性和阴性对照的例子），但它们的制备必须与测试组织类似（见EP 15 免疫组化试验）。

表1 | 选定的一级抗体的合适组织对照的例子

[a]此列表仅用于说明目的，并不全面；具体信息请参考产品标签。

[b]被列为阳性和阴性的组织都包含了指定抗体的阳性和阴性染色成分。

ALK，无性淋巴瘤激酶；ER，雌激素受体；HER2，人表皮生长因子受体2；NSCLC，非小细胞肺癌。

NSCLC，非小细胞肺癌；UCC，尿路上皮细胞癌。

正常的阑尾、皮肤、输卵管、胎盘、子宫内膜和扁桃体通常被用作外部组织对照，因为它们很容易获得，而且一般都经过与测试组织类似的固定和处理。为了检测正常或良性组织中不表达的抗原，可以使用先前定性的肿瘤组织。

非人类或尸检组织，尽管不是很理想，但也可以使用，商业控制组织也可以使用，如果它们的目标特异度和分析前的质量能够得到验证。

一些IHC检测允许或要求使用石蜡包埋的细胞系颗粒作为对照，以代替或补充传统的组织样本。多个对照组织或细胞系可以被嵌入并排列在一个微阵列区块中，以便在一个切片中同时评估几种类型的组织或染色强度水平。

无论何种类型的组织对照，都必须使用相同的试剂和方法与试验组织同时进行染色。由于必须经受与测试组织相同的测试条件，内部对照在评估假阴性染色的可能性方面特别有用；患者样本中的内部阳性对照的充分染色强烈表明该样本的阴性结果是准确的。

例如，如果在良性导管细胞中检测到ER表达，那么相邻的乳腺癌没有染色就可以自信地解释为阴性结果。

如果使用外部对照，最好是放在与测试组织相同的载玻片上，而不是放在不同的载玻片上，因为这样可以确保分析条件是相同的。使用单一的玻片上的组织对照，包含阳性染色和阴性染色的对照元素，既符合成本效益，又是最佳做法。

NRC通常是患者组织的一个重复切片，与患者测试组织平行染色。染色过程是相同的，只是用阴性对照试剂来代替主要抗体。NRC用于监测除主要Ab以外的检测成分所引起的非特异度染色，评估背景染色水平，并识别可能导致对检测标本进行错误解释的假象或内源性色素（如血色素、脂褐素或黑色素）。

理想的阴性对照试剂是一种已知对任何已知人类表位的亲和力很低的抗体，与原发性抗体具有相同的种类和免疫球蛋白同型，并以相同的浓度稀释在同一缓冲液中。偶尔，虽然信息量较小，但也会使用缓冲液本身（即不含Ab）来代替。

尽管CAP不再要求使用NRCs对进行临床IHC检测的实验室进行认证[使用阿维菌素-生物素（AVB）检测系统的检测除外]，但NRCs仍然是一些IVD检测的强制性组成部分，正如包装说明或当地监管机构批准的使用说明中所指出的。

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