免疫组化（IHC）是使用标记的抗体（Abs）来检测生物样本中感兴趣的抗原，70多年前由Coons首次报道，他使用荧光素标记的Abs来检测被巨噬细胞摄取的细菌。尽管此后先进的基因组学和蛋白质组学技术不断发展，IHC不仅仍然具有相关性，而且已经成为诊断性组织病理学实践中普遍利用的工具。

现在，它是临床上必不可少的补充和伴随诊断测试（在本文中中，统称为「c/CDx」测试）的基础，在这个个性化的医疗保健时代，主要是在肿瘤学领域，为重要的治疗决策提供信息[2]。

在Coons的工作之后，IHC方法学的进展包括：开发了发色报告酶，如辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP），开发了将酶与Abs共价连接（共轭）的技术，以及使用胰蛋白酶消化法来去除组织抗原。

特别是20世纪80年代自动IHC染色系统的发展，加速了IHC技术在全世界病理实验室的广泛整合；也推动了质量的提高和方法的标准化。

作为一种方法，IHC的长寿可以归功于其独特的属性组合。

首先，它作为一种诊断、预后和治疗反应预测的工具，广泛适用于整个临床护理过程。

第二，自动IHC技术很容易在常规的临床护理环境中实施，甚至在那些技术能力不强的地方。

第三，它允许蛋白质生物标志物在组织和细胞结构的背景下被可视化（图1）。

最后，它以相对较低的成本提供高价值的医疗和临床信息。

图1 | 组织抗原的免疫组化检测。IHC检测目标抗原的直接（左）和间接（右）检测方案。在直接方法中，检测标签与一级抗体共价连接。间接方法使用一个或多个中间分子（通常是共价二级抗体-检测标签复合物，如图所示）来连接检测标签和一级抗体。间接检测方法放大了结合信号，提高了灵敏度。

缩略语：Ab，抗体；IHC，免疫组织化学。

组织样本在IHC检测前要经过几个分析前处理步骤（图2）。尽管每个步骤使用的条件有可能极大地影响IHC染色结果，但不同采集点和实验室之间的差异并不罕见。尽管全球检测指南已经规定了一些分析前变量的最佳目标，并且正在进行标准化工作，但这些工作还处于起步阶段。

图2 | 分析前的变量。IHC测试前的组织处理步骤用圆圈表示。可能影响IHC染色的相关分析前变量以斜体显示在其适用步骤旁边。温热缺血时间，样品去血管化和手术切除之间的时间；冷缺血时间，样品采集和开始固定之间的时间；组织处理方案，准备石蜡包埋组织块时涉及的脱水、清算和石蜡浸润步骤的数量和时间；显微切割，将组织切成薄片安装在玻片上；切割玻片储存，切片安装与IHC染色之间的时间。IHC，免疫组织化学。

这种情况给IHC检测的开发者带来了艰巨的挑战，因为临床IHC检测是针对特定范围的分析前条件开发和优化的。这些条件和支持其使用的数据由监管机构审查，并出现在每种测定的包装内。因此，IVD IHC检测结果只对根据产品包装说明中描述的分析前程序制备的标本有效。

一般IHC测试所使用的样本，都是固定在10%福尔马林中并嵌入石蜡的组织[即福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织]。所以我们在后续的文章中，都是假设使用FFPE组织。

好了，以上就是今天分享的全部内容，如果大家有什么疑问，欢迎在后台给我们留言，或者加入我们一起讨论，若觉得文章不错，也请关注我们，以免错过后续更新~