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技术贴:微球标记过程中为什么总是聚集?

目前就层析平台而言,胶乳微球正在慢慢地取代胶体金的地位。因为胶乳微球的制备相对于烧金而言条件不是特别的考验细节,唯一麻烦的地方就是标记过程总是出现聚沉现象。


通常这种聚沉会发生在edc的加入后,或者抗原抗体的加入后。通常表现为在edc或抗原抗体加入后,2-5分钟内,胶乳微球慢慢呈现肉眼可见的大颗粒,甚至会吸附在塑料管壁上,多多少少会影响标记人的心情,尽管有时候可能对于你最终的实验结果可能不会有太大的影响。


有的公司对于这种聚沉采取的是以暴制暴的手段,整个活化和标记过程一直处于超声振荡的状态,这确实是一种解决问题的思路,就是对实验操作人不太友好,他们需要很长时间保持一个姿势,还要承受超声带来的噪音。尽管有人想到了用旋转蒸发仪代替人工,但貌似轻微的旋转对于大体积的标记也是不尽人意。


有些同僚建议改变标记pH,这确实是很有用的一种手段,一看他就是切实做过优化的。一般情况下,对于鼠抗IgG的标记,我建议大家还是尽量从碱性条件开始摸索,理论上碱性条件有利于让伯氨基处于非正电状态,更有利于活化中间物到标记产物的方向进行。但这也不是绝对的,我建议大家还是像摸索胶体金的最佳标记pH一样,从6.0到9. 0尝试一下,有的pH条件下能有效代替超声。我见到一些人总是用pH7.2的PBS当做标记缓冲液,这个条件确实能适用于大部分抗体,但是最多也就是能做到不好不坏的结果,对于我这种有点强迫症的人,我希望做的更完美一点。


在这里给大家介绍一个小窍门,可以完美的替代超声---表活的应用。对于新材料的实验,大家尽量多参考类似merck这种的大公司,他们在微球标记的时候通常是建议加入表活的,我在这里不说具体用哪种,这个需要您自己去思考和实践,大家只需要知道痕量的表活对于抗体而言没有影响,但是对于微球的分散性确实起到了相当积极的效果。只要品种和含量添加的恰当,完全不需要超声,效果也非常OK,释放效果也是非常均一流畅。


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信息来源:IVDdiagnosis,作者:IVDdiagnosis


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