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胶体金常见问题分享(一)——中空

在日常的胶体金实验中,有些人可能会遇到一个问题,上样的时候,样本绕着T线或者C线走,因此样本爬行完了,NC膜就形成了一个T线或者C线看起来中空的现象,如下图:

为什么液体会绕着包被原料走呢?那肯定是液体流经这个地方的时候被堵住了。是什么原因导致的“堵”呢?我们来思考一个小常识:比如你吃饭的时候不小心把一个残渣落在了茶几上,几天没擦,干在上面了。你用湿抹布去擦,发现残渣硬邦邦的根本擦不掉,而且主要是,它不吸水!只有吸水了它才容易被擦掉,所以怎么让它快速吸水呢?假如你的食物残渣是含有蜂蜜或者是淀粉之类的,泡一会就相对容易擦掉;假如食物残渣是肉制品或者含油脂较多的,你还得往抹布上放点洗洁精。
好了,我们再回来分析一下我们的试纸条中空问题。蛋白包被在NC膜上,如果它本身的吸湿性很差,那么血清自然会绕着它走。怎么能够让它吸湿性增强呢?可以考虑加糖!糖有很强的吸湿性,如果我们在包被缓冲液里加点糖,那蛋白吸水的能力会大大增强,与血清接触的时候不至于会绕着走,可以快速地渗透;还可以考虑加醇!醇的加入也可以部分提升蛋白的亲水性的,这是很多前辈给我们留下来的宝贵经验。那加洗洁精可以吗?可以加,但不是加在NC膜上,NC膜对于表面活性剂是十分敏感的,如果你感兴趣的话,往包被缓冲液里面加点吐温或者甘油试一下,可能线条宽度会让你怀疑人生。
我们可以将表活加在样品垫处理液,或者是样品稀释液,它们可以降低血清的表面张力,使其与蛋白的浸润性变强。但是表活的加入很多时候会引入假阳,而且这个假阳很有特色,就是中空一样的假阳,只有T线的上下边缘会出现红色印迹。这种情况我也不太好解释具体的原因,只是我了解的是,一般假阳都是基于静电吸附或者是疏水作用这种非共价键产生的,如果我们能加入某种成分改善抗体的带电情况或极性,这种情况应该就可以解决。比如加入微量的SDS或者酪蛋白,引入大量的负电荷;或者是加入BSA、OVA这种杂蛋白,起一个流动封闭的作用,可能假阳的情况会有所改善。
还有一个因素,与包被抗体引入的疏水和假阳可能都有关系,那就是盐离子浓度,尤其是以氯化钠为代表的盐离子浓度。盐离子浓度过高,烘干的时候nc膜表面会形成结晶,也会导致其瞬时浸润性变差;而且貌似盐离子浓度高的话,表活的加入引发假阳的概率会更高,当然这不是绝对的,也有相反的时候。不太好解释原因,大家可以根据自己的经验来调试和观察。
总而言之,改善中空的中心思想就是改善浸润性,中间若产生其他问题可以再逐一分析和解决,总会达到你的预期。


来源:IVDdiagnosis 

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