目前新冠病毒抗原检测试剂的兴起，会涉及到病毒裂解液的使用，这由此让我想起了很多种相关液体，比如细胞裂解液，抗原抗体复合物解离液等，想结合自己的经历谈一谈各种裂解液的组成及作用。当然了本次只针对于免疫方面，至于类似用异硫氰酸胍裂解病毒抽提RNA的分子方面的知识，我不擅长，所以不敢多讲。并且免疫和分子的目的不一样，免疫学检测的是蛋白，就是想办法把我们需求的蛋白温和地抽提出来，核酸去不去除无所谓，只要不影响后续的检测就可以；分子检测的是核酸，提取过程反而是蛋白变性的越彻底越好。先来讲一讲细胞裂解液。就像它的名字一样，它就是来裂解细胞的，一般用来提取胞膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白等等，在做western、免疫沉淀、细胞特定蛋白的检测等经常用到。我举个例子，比如我想测试尿液脱落细胞特定蛋白的试剂检测，这个蛋白是脂溶性的，存在于细胞膜的磷酸双分子层中间，我们普通的试剂（如PBS）通过物理方法的超声破碎是难以提取到可溶且分散的单分子蛋白的，通常脂溶性蛋白会聚合形成难以溶解的乳浊大颗粒，对试剂检测提高难度。这时候我们就可以借助细胞裂解液，实现以下几个目的：1. 细胞膜通透性增加甚至完全破碎，特定蛋白得以释放；2. 特定蛋白能在该溶液中保持稳定的可溶状态，不得出现变性；3. 该溶液的成分不得影响抗原抗体免疫反应的结合；4. 细胞破裂后的核酸不得出现胶状凝块，影响免疫检测。细胞裂解液的主要成分就是去垢剂，去垢剂种类的选择和含量的多少就决定了它可以具体应用在什么细胞的什么蛋白的提取。下面我列了一个图，全面地讲述了目前市面上适用于免疫分析的细胞裂解液的种类和配方，供大家参考：
其实病毒裂解液和细胞裂解液的原理几乎相同，一些表面活性剂可以穿透病毒的外壳蛋白（S蛋白和M蛋白）使得病毒发生裂解，甚至能使得核蛋白和RNA发生解离。如果你检测的是核蛋白，为了使得N蛋白和核酸解离的更加充分，可以借鉴RNA的提取过程，加一些阳离子去垢剂，如CTAB，使得核酸形成复合物沉淀而增加核蛋白的检出效率。下面我想讲一讲关于抗原抗体复合物的解离，我接触过的用途目前只有一个，那就是25-OH维生素D和VDBP的解离，因此我就结合着这个项目来说明一下。做过该项目的人应该知道，维生素D 85%以上是与维生素D结合蛋白紧密结合的，只有不到1%是游离的，因此检测的时候要让它与结合蛋白分离。这时候我们要考虑维生素D本身的性质和整个检测体系和方法：我们首先要把维生素D和结合蛋白分离，学过免疫的都知道，抗原抗体的分离是需要极端pH条件的，我们可以使用强酸或者强碱让它们分离开；然后呢，结合蛋白我们不需要，因此我们可以让他变性掉，彻底失去与VD的结合能力，蛋白变性剂一般有醇、表活、疏水剂、还原剂或EDTA等蛋白活性抑制剂等；还有一点，维生素D是脂溶性的，你得考虑让他在该溶液中是可溶解的，因此可以考虑加一些表活或者两性溶剂，如DMF。最重要的一点，这个体系是不能影响你检测的，所以刚开始强酸强碱的条件你得想办法中和掉，表活和变性剂的使用要适量，那些做荧光层析的小伙伴，这是你们更需要注意的地方。达到以上条件，这个解离液基本上也就完成了。我给大家列出罗氏和雅培关于该液体的描述，大家可以参考一下：
罗氏
雅培
文章来源于IVDdiagnosis，作者IVDdiagnosis,IVD学习笔记
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