对于IVD试剂而言，各个组分几乎都涉及蛋白偶联问题，举几个例子：
荧光蛋白、酶等与抗体的偶联。
小分子制备半抗原。
类人基质血清的制备。
下面我仅凭个人经验对各个举例进行大致的说明，如果大家有疑义的，以后可以互相交流。
1. 荧光蛋白、酶等与抗体的偶联
目前对于酶促类型的化学发光，经常用到的就是辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP）。对于HRP与抗体的标记，大家经常用到的就是高碘酸钠法，由于其本身含糖量较高（约20%），游离的伯胺含量又很低（每个分子能用的-NH2只有2个）所以相对来说标记比较简单，唯一的缺点就是交联问题，比如产物中含有大量的HRP二聚体和聚集的偶联物，不过只要不影响使用，倒是不用在乎(具体的标记过程自己百度)。 碱性磷酸酶标记起来可能没有HRP那么简单，它的含糖量不如HRP高，最多也就10%（小牛来源），并且如果ALP是原核表达的，它根本不含糖，再加上它本身的赖氨酸含量是比较多的（40-60个），因此使用高碘酸钠氧化完，自交联的可能性就非常大。本人没做过几次ALP的标记，只能给大家就看过的一些文献大致讲一讲思路。一些人会用到戊二醛法，就是用过量的戊二醛先处理ALP，让其产生活泼的醛基，然后在碱性条件下与抗体的伯胺反应生成亚胺，再用还原剂去还原，最终得到酶标产物。这种方法理论上是可行的，但是据说偶联效率比较低，朋友们有用到的可以自己尝试，度娘也已经给出了明确的步骤。还有一种就是用到的双功能试剂，比如含有琥珀酰亚胺酯和马来酰亚胺基团的试剂。举个例子，比如用含有双琥珀亚胺酯的试剂，先用过量的试剂去和ALP反应，然后将产物再与抗体反应，即得产物（标记过程可以自己去查阅文献）。据文献中说这种产物的热稳定性没有高碘酸钠法制备的稳定，他们还是推荐高碘酸钠法制备。具体哪种方法靠谱，兄弟们只能自己去验证了。对于荧光蛋白，一般最常用的就是藻红蛋白，目前就是流式荧光磁微粒发光用到的最多，目前有商品化的标记试剂盒（HRP和ALP其实也有很多标记试剂盒了，只不过成本高），我不做过多阐述了，有兴趣可以了解一下透景的产品。
2.半抗原的制备
小分子与载体蛋白的偶联跟蛋白与蛋白之间的偶联相比，应该算是比较容易的，因为不会产生特别严重的交联问题，就是产物最终的活性偶联结束需要好好验证一下，并且研究一下如何更好地回收偶联产物。一般通常用到碳二亚胺/n-羟基琥珀酰亚胺的结合，效率比较高。我们这里需要注意一下，你所偶联的小分子的羧基和氨基的含量，比如只简单地含有羧基，那就好办了，活化完直接加到载体蛋白里面就可以了；如果是一个多肽，既含有氨基又含有羧基，可以考虑封闭氨基，如加入酸酐反应，封闭一个氨基的同时，引入一个羧基；如果没有氨基和羧基，只有酮基，那么可以通过羧甲氧基铵盐酸盐引入羧基肟。总之，看一下有机化学，都能解决。这里我想说一下，一般人都会用到EDC（水溶性）和NHS，一步法和两步法视情况。其实DCC（脂溶性）也挺好用的，就是有机溶剂的量要控好，避免蛋白变性。
其实还有曼尼希反应等多种偶联方法，就不一一列举了，毕竟现在做这个服务的人有很多，小分子你可以找人直接合成，多肽你可以通过基因工程让人给你直接造一个融合蛋白也可以（如多肽-ALP）。
3.类人血清的制备
一些抗体检测类试剂，高值血清的收集一直是大家头疼的问题，如何制备与人特异性血清抗体类似的动物抗体来代替人血使用，其实可以通过偶联的方式解决（目前重组抗体技术也很成熟，只不过成本太高，有钱的话，可以试试）。比如你想收集大量的特别高值的人CCP抗体，不如制备点羊抗CCP，然后偶联上人的IgG（Fc），不得挺好么。具体的偶联过程通过上述描述，自己揣摩一下吧。
文章来源于IVDdiagnosis，作者Biodogzhao
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