Cod Uracil-DNA Glycosylase                                 

Cod UNG（尿嘧啶DNA糖基化酶）             

描述

Cod UNG酶能够选择性水解双链或单链DNA中尿嘧啶与脱氧核糖之间的N-糖苷键，形成缺失一个碱基位点（无嘧啶）的DNA链，在碱性溶液及高温条件下会进一步水解断裂，从而被完全水解；且Cod UNG酶对RNA中的尿嘧啶无活性。该酶是PCR、RT-PCR及qPCR等分析方法中消除carry-over污染的理想选择。在分子诊断中，即使痕量的DNA污染也能显著降低检测灵敏度，因此，UNG酶在分子诊断领域应用非常广泛。

与其他来源UNG酶相比，Cod UNG酶具有低温活性、在温和热处理条件下（55℃）完全不可逆失活等优势，能够提高PCR反应的效率及灵敏度，并能提高PCR产物的长期稳定性，便于下游应用，如克隆构建、测序等。此外，在55℃条件下完全不可逆失活，Cod UNG能用于一步RT-qPCR中。

Cod UNG适用于常见的缓冲体系，兼容多种样本类型。Cod UNG的优异性能，使其易于使用、便于自动化操作、兼容绝大多数工作流程，如PCR、qPCR、RT-PCR等。

Cod UNG的开发及生产流程符合ISO13485质量体系认证。此外，为了满足欧盟REACH法规要求，ArcticZymes推出Triton X-100 free的产品（Cod UNG Triton FREE）；同时，随着应用场景的拓展及行业更高要求的发展，ArcticZymes也推出了glycerol-free的可冻干剂型。

优势

1.     第一款热不稳定的UNG酶，反应更快、温度更低，室温孵育5分钟即可完成；

2.     第一款完全不可逆热灭活的UNG酶（55℃），改善下游应用实验结果；

3.     提高PCR/qPCR检测灵敏度；

4.     兼容多种样本类型，尤其适合PCR诊断应用。

推荐应用

1.     用于PCR及RT-PCR中消除carry-over污染；

2.     改善PCR产物的下游应用，如克隆构建、测序等；

3.     反应温度更低，更适于病毒检测；

4.     能用于一步RT-PCR反应。

使用指导

Cod UNG能够兼容市售所有master mix。务必确保：PCR体系中含有dUTP。PCR产物用于下游分析之前，保存在4℃或-20℃。

数据

1.     完全不可逆热灭活

目前市售有多种商业化的UNG酶，其中大多数是细菌来源。如果不涉及post-PCR的应用，大多数UNG酶都能满足使用要求。然而，如果需要将PCR产物用于下游分析，如克隆构建和测序，那么UNG酶的再激活（reactivation）及随之引起的PCR产物降解是大多数市售UNG酶的一个通用问题。ArcticZymes的Cod UNG酶是目前第一款完全、不可逆热灭活的UNG酶。

Figure 1. Cod UNG是唯一一款完全、不可逆热灭活的UNG酶。PCR反应体系包含10mM dATP、dCTP、dGTP和20mM dUTP及1U的UNG酶（Cod UNG及另外4种市售型号）。PCR反应后，室温孵育0hr、1hr、3hr、6hr及24hr，然后agarose-gel分析PCR产物降解情况。

Figure 2. 两种UNG处理的PCR产物的测序图谱。室温下，用1U的Cod UNG（A）和1U的E.coli UNG（B）处理PCR产物3hr，然后进行测序分析。由图可知，Cod UNG处理的PCR产物完整性更好、质量更高。

2.     提高qPCR灵敏度

在分子诊断的一些应用中，如病原检测，样品中目标分子含量有限，因此检测灵敏度成为非常关键的因素。Carry-over DNA污染严重降低qPCR的检测灵敏度。使用Cod UNG能够保持PCR产物的完整性，并能够去除污染物、恢复灵敏度及检测的动态范围。

Figure 3. 制备5个浓度的人血清稀释的RNA病毒样品，各样品中加入含尿嘧啶的扩增序列模拟carry-over DNA污染。使用标准一步法RT-qPCR对RNA定量检测。Carry-over DNA严重降低检测灵敏度（橙色），加入Cod UNG恢复灵敏度（绿色）到与对照组（黄色）一致。

3.     更适于病毒检测

病毒诊断检测的困难之一是病毒固有的基因组变异。Cod UNG酶活温度范围更宽，其中较低的酶活温度，更适于病毒诊断。降低引物退火的反应温度，引物结合区段错配容忍度增强，——这能检测更多的病毒亚型，减少诊断中假阴性的风险。Cod UNG在低温时的高活性，及50℃条件下不可逆失活，成为病毒诊断流程中RT-qPCR的理想组分。

Figure 4. 在人total RNA样品中，加入Cod UNG、E. coli UNG及另外两个品牌（A和B）的冷适应UNG，进行RT-qPCR检测。A和B品牌的UNG在50-60℃条件下不能完全失活，降解部分cDNA从而影响了检测灵敏度；E. coli UNG反应温度相对较高（最适温度为50℃左右），影响RNA反转录成cDNA效率，且不能完全失活进而降解部分cDNA。

4.     兼容多种样本类型

血液样本常用于直接PCR病原检测诊断。实践发现，血液样本的组分通常会抑制PCR中的酶活性，如UNG。Cod UNG能很好耐受全血及血浆中的组分，如血清和抗凝血剂等。由于它能兼容更广泛的生物样本类型，Cod UNG是直接PCR诊断的理想选择。

Figure 5. Cod UNG能够兼容多种血液样本组分。多种血液样本组分存在情况下，如血清、EDTA处理的血浆、Na-Heparin处理的血浆、EDTA处理的血液及Na-Heparin处理的血液，检测Cod UNG的活性。

酶学特征

来源：Arctic cod origin, E.coli重组表达

酶比活：>5.00 x 10^5 Units/mg

酶活定义：37℃条件下，一个单位的UNG酶是指1hr内从含尿嘧啶的DNA中释放1nmol尿嘧啶所需的酶量。

纯度：高纯级别，无其他核酸酶活性残留。

热灭活：50℃-55℃、20分钟，完全不可逆失活。